本指導(dǎo)原則是為藥典要求無菌的藥品、生物制品、原料、輔料、及其他品種無菌檢查用隔離系統(tǒng)的驗證提供指導(dǎo)。
無菌檢查用隔離器是為產(chǎn)品無菌檢查試驗提供無菌環(huán)境的一種設(shè)備。封閉式隔離器不直接與外界環(huán)境相連，使用無菌接口或快速轉(zhuǎn)移通道進(jìn)行物質(zhì)傳遞，一般用于無菌檢查；開放式隔離器允許材料通過艙門進(jìn)入，艙門內(nèi)有一定的壓力阻止微生物的進(jìn)入。物品可通過無菌傳遞進(jìn)入隔離器，整個傳遞過程中可保持隔離器內(nèi)部空間和外部環(huán)境完全隔離。隔離器內(nèi)部能夠反復(fù)進(jìn)行滅菌，內(nèi)壁可用滅菌劑處理，以去除所有的生物負(fù)載，滅菌完成后，隔離器通過高效空氣過濾器（HEPA）或更高級別的空氣過濾器向其內(nèi)部輸送潔凈空氣來維持內(nèi)部的無菌環(huán)境。隔離器的使用從根本上避免了操作人員與實驗用物品的直接接觸，操作人員無需穿著專用潔凈服，而是通過隔離器上的操作手套或半身操作服對艙內(nèi)物品、儀器進(jìn)行操作。手套-袖套組件或半身操作服是隔離器艙體不可分割的一部分，它們由柔軟的材料制成且與所采用的滅菌劑兼容。因此，使用隔離器進(jìn)行無菌檢驗，可以避免實驗用物品和輔助設(shè)備被污染，提高了無菌試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
一、無菌檢查用隔離器的結(jié)構(gòu)
隔離器一般是由不銹鋼、玻璃、硬質(zhì)塑料或軟質(zhì)塑料（如聚氯乙烯）建成。隔離器的結(jié)構(gòu)一般包括：
1. 空氣處理系統(tǒng)
用于無菌檢測的隔離器應(yīng)配備可截留微生物的高效空氣過濾系統(tǒng)（或更高級別的過濾系統(tǒng)）。靜態(tài)時，隔離器內(nèi)部環(huán)境的潔凈度要求應(yīng)達(dá)到我國藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）現(xiàn)行版中A級空氣潔凈度的要求。當(dāng)隔離器與外界環(huán)境有直接開口時，內(nèi)部應(yīng)通過持續(xù)足夠的正壓來維持隔離器內(nèi)部的無菌環(huán)境。
2. 傳遞接口及傳遞門
滅菌后的培養(yǎng)基、稀釋液和實驗用品可以通過帶傳遞功能的滅菌器直接無菌傳遞到隔離器內(nèi)。此外，不同的隔離器也可以通過專門設(shè)計的快速傳遞門（RTP）連接，以實現(xiàn)將實驗物品在兩個或多個隔離器之間進(jìn)行無菌傳遞。RTP上未經(jīng)滅菌的表面通過互鎖環(huán)或法蘭互相疊合，并通過密封圈封閉，從而防止微生物進(jìn)入隔離器內(nèi)。
3. 滅菌設(shè)備
滅菌氣體發(fā)生器與隔離器之間氣體管路的連接，應(yīng)確保其密封性。在接近隔離器的部位，進(jìn)氣與排氣管路上應(yīng)分別安裝有閥門，當(dāng)氣體發(fā)生器與隔離器的連接、分離或隔離器進(jìn)行無菌維持時，進(jìn)、排氣管路閥門應(yīng)予以關(guān)閉。滅菌氣體應(yīng)通過高效空氣過濾器（HEPA）進(jìn)入隔離器內(nèi)。滅菌結(jié)束后須對滅菌氣體進(jìn)行排空，保證在進(jìn)行無菌檢測前，隔離器內(nèi)部的滅菌氣體濃度低于一定值，消除滅菌氣體對無菌檢測的影響。
4. 配套設(shè)備與輔助設(shè)施
隔離器內(nèi)部安裝無菌檢查使用的配套設(shè)備與輔助設(shè)施，如無菌檢查過程中使用的蠕動泵、真空泵及連續(xù)環(huán)境監(jiān)控設(shè)備，其運行不得對隔離器的內(nèi)部環(huán)境造成影響，配套設(shè)備上的電機等關(guān)鍵部件及排氣口設(shè)計應(yīng)置于隔離器的外部，以防運轉(zhuǎn)時產(chǎn)生的擾動氣流、排出的廢氣對隔離器的環(huán)境產(chǎn)生破壞，并防止其內(nèi)部受到化學(xué)滅菌劑的腐蝕而產(chǎn)生安全隱患。
二、隔離器安裝位置的選擇
無菌檢查用隔離器安裝環(huán)境的潔凈度要求建議不低于我國現(xiàn)行GMP中D級空氣潔凈度要求，安裝隔離器的房間應(yīng)限制無關(guān)人員出入。應(yīng)保證隔離器安裝地點周圍有足夠的空間，以便于隔離器的移動、物品的輸送和正常維護(hù)。
為保證操作人員的安全性與舒適性，安裝隔離器的房間內(nèi)應(yīng)能控制溫濕度。對于某些滅菌技術(shù)，溫濕度的控制是至關(guān)重要的。隔離器應(yīng)避免安裝在房間通風(fēng)口直吹的地方，否則可能導(dǎo)致隔離器艙體部分區(qū)域被冷卻，從而造成滅菌過程中滅菌氣體在隔離器內(nèi)壁局部冷凝。當(dāng)采用對溫度敏感的滅菌方法時，隔離器房間的溫度應(yīng)當(dāng)是均一的。
三、隔離系統(tǒng)驗證
無菌檢查用隔離系統(tǒng)的驗證是保證無菌檢查所需無菌環(huán)境的必要條件，隔離系統(tǒng)驗證在完成安裝驗證后應(yīng)定期進(jìn)行以下驗證。
1. 操作驗證
證明所有報警功能均能按照設(shè)定的要求正常工作；證明 隔離系統(tǒng)可按設(shè)定參數(shù)值運行。
2. 隔離器完整性驗證
隔離器在正常運行條件下應(yīng)能保持良好的完整性。通過泄漏測試來驗證設(shè)備完整性是否達(dá)到制造商的要求。為避免外來污染，正常操作時隔離器維持在正壓下，壓差范圍為 20～50Pa。應(yīng)驗證隔離器在動態(tài)條件下維持正壓差的能力。同時，隔離器的高效空氣過濾器（HEPA）也需定期進(jìn)行完整性檢測。
3. 滅菌驗證
隔離器表面、隔離器內(nèi)的設(shè)備及進(jìn)入隔離器的各種物料都應(yīng)經(jīng)過處理以降低微生物負(fù)載。用于隔離器、實驗物品的滅菌方法應(yīng)能達(dá)到或超過使生物指示劑下降6個對數(shù)值的效果。可使用某種合適的、高抗性的生物指示劑來驗證。完全滅菌法應(yīng)采用每單位10⁶孢子數(shù)的生物指示劑，而陰性對照應(yīng)該采用每單位孢子數(shù)不少于10⁶孢子數(shù)的生物指示劑。使用合適數(shù)量的生物指示劑進(jìn)行試驗可以從統(tǒng)計學(xué)上證明滅菌效果是可以再現(xiàn)以及滅菌劑的分布是否合適。尤其要注意那些滅菌劑濃度較低的地方。隔離器內(nèi)物品和設(shè)備滿載時需要用更多的生物指示劑進(jìn)行試驗。滅菌程序的確定要經(jīng)過三次連續(xù)的驗證且能使生物指示劑下降超過6個對數(shù)值。
4. 滅菌循環(huán)驗證
運行一個滅菌循環(huán)，以確認(rèn)滅菌循環(huán)各階段實際運行值與其設(shè)定值是否相符。
5. 隔離器內(nèi)部潔凈度驗證
隔離器內(nèi)部的潔凈環(huán)境應(yīng)進(jìn)行驗證，其懸浮粒子（靜態(tài)的）和微生物應(yīng)達(dá)到我國現(xiàn)行GMP中A級空氣潔凈度的要求。
在滅菌氣體滅菌完成后，通過監(jiān)測滅菌氣體的濃度，保證在無菌檢測前隔離器內(nèi)的滅菌氣體殘留量低于可接受值。
6. 儀器儀表的驗證
需對隔離器配置的儀器儀表，比如H₂O₂傳感器、溫濕度傳感器、壓力傳感器等進(jìn)行定期校驗。
隔離器一般還應(yīng)進(jìn)行日常驗證，如操作驗證、隔離器完整性驗證等。
當(dāng)隔離器出現(xiàn)運行異常、艙體環(huán)境監(jiān)控異常或變更運行程序、運行參數(shù)、無菌檢查隔離器安裝場地變更等應(yīng)進(jìn)行再驗證。再驗證應(yīng)按照文件化的程序及規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)實施。再驗證的結(jié)果應(yīng)形成記錄并保存。
四、隔離器的應(yīng)用
1. 包裝完整性驗證
隔離器常用的滅菌氣體在滅菌循環(huán)過程中不會穿透螺旋蓋試管、壓塞玻璃瓶、西林瓶、安瓿等密封完好的容器，然而，滅菌氣體對某些透析包裝物會產(chǎn)生不利影響，可能造成對微生物生長的抑制。操作人員應(yīng)通過驗證試驗來證實暴露于滅菌氣體中的供試品包裝容器及無菌檢查過程中所用的器材、稀釋劑、培養(yǎng)基，不會由于滅菌氣體的滲透而影響供試品中低水平微生物污染的檢出。當(dāng)滅菌氣體存在滲入產(chǎn)品容器、實驗輔助材料、培養(yǎng)基或稀釋液的潛在風(fēng)險時，操作人員可采取適當(dāng)?shù)拇胧邕x用能夠耐受滅菌劑滲透的包裝材料包裝或?qū)⒉牧戏湃霟o菌的密閉容器中，以盡量減少滅菌劑進(jìn)入包裝或向容器中滲透，但所采取的措施應(yīng)避免造成滅菌不徹底。
在某種程度上，可通過降低滅菌劑濃度及縮短滅菌周期，來降低滅菌劑浸入包裝和容器內(nèi)。
在進(jìn)行無菌檢驗之前，通常使用滅菌劑處理產(chǎn)品包裝表面來減少進(jìn)入隔離器的物品表面微生物的負(fù)荷量，在使用殺菌劑處理產(chǎn)品包裝時，應(yīng)證明該過程沒有對存在于產(chǎn)品中的低水平污染的微生物造成影響，不會影響檢驗結(jié)果。建議用化學(xué)和微生物挑戰(zhàn)試驗來檢測包裝物對污染的抵制能力。經(jīng)過隔離器全部的滅菌過程后，需進(jìn)行殺菌劑抑制細(xì)菌和真菌情況的驗證[參照無菌檢查法（通則1101）]。
2.隔離器內(nèi)部環(huán)境的無菌維持
隔離器內(nèi)部環(huán)境在操作周期內(nèi)的無菌維持需要經(jīng)過驗證。隔離器內(nèi)的微生物監(jiān)控，可通過對滅菌后的第一天和無菌保持期的最后一天的采樣，并對采樣進(jìn)行培養(yǎng)，通過周期性的采樣分析，可以實現(xiàn)隔離器內(nèi)無菌保持情況的驗證。隔離系統(tǒng)出現(xiàn)故障或者由于偶然因素引起的微生物污染必須進(jìn)行檢測。
隔離器內(nèi)部表面可采用平面接觸碟、不規(guī)則的表面可采用拭子搽拭進(jìn)行微生物監(jiān)控，由于培養(yǎng)基殘留會使隔離器產(chǎn)生染菌的風(fēng)險，因此，最好在檢驗完成后進(jìn)行微生物監(jiān)測，如果試驗中有培養(yǎng)基殘留，應(yīng)清理干凈。
檢驗用具和樣品進(jìn)入隔離器的過程最可能造成微生物的污染，所有進(jìn)入隔離器內(nèi)部物品的無菌驗證是非常重要的，另外，墊圈應(yīng)定期檢查，確保其完整，避免微生物的進(jìn)入。手套和半身衣可能是另一個微生物污染源，尤其是用于處理無菌檢驗物品的手套，應(yīng)當(dāng)特別關(guān)注；選擇手套時應(yīng)考慮手套的穿刺抗性、耐磨性及較好的觸感；試驗用的手套應(yīng)保持其完整性，手套上微小的破損很難檢查出來，但使用時，在拉伸情況下，即可發(fā)現(xiàn)手套上微小的破損；用戶使用檢測儀對手套進(jìn)行檢測時，檢測條件要盡可能與手套使用時的條件一致，微生物檢測可補充物理檢測，檢測時，將手套浸入0.1%的蛋白胨水溶液中，然后采用薄膜過濾法過濾0.1%的蛋白胨水溶液，取出濾膜進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)是否生長微生物判定檢測手套的完整性，本法可以檢測出其他方法檢測不出的泄露。
采用隔離器內(nèi)部進(jìn)行連續(xù)的塵埃粒子檢測，可快速檢測到過濾器的泄漏，也可使用便攜式的塵埃粒子檢測器進(jìn)行周 期檢測，塵埃粒子檢測取樣不能對隔離器內(nèi)部的無菌環(huán)境產(chǎn)生影響。
3. 無菌檢驗結(jié)果的解釋
隔離器內(nèi)部空間及表面已經(jīng)過高水平的滅菌工藝處理，操作人員與無菌檢查環(huán)境沒有直接接觸，而且系統(tǒng)的完整性經(jīng)過驗證，因此，在功能運行正常的隔離器內(nèi)進(jìn)行無菌檢測，出現(xiàn)假陽性的概率很低，盡管如此，隔離器也僅是個機械設(shè)備，操作人員仍需遵循無菌操作規(guī)范。當(dāng)出現(xiàn)無菌檢查試驗結(jié)果陽性時，應(yīng)按照無菌檢查法中結(jié)果判斷的要求進(jìn)行分析，并作出該試驗結(jié)果是否有效的判定。
4. 安全與培訓(xùn)
操作人員在使用隔離系統(tǒng)進(jìn)行無菌檢查之前，應(yīng)接受特定操作規(guī)程、日常維護(hù)及安全等相關(guān)知識的培訓(xùn)，并經(jīng)考核合格后方可上崗，培訓(xùn)內(nèi)容及培訓(xùn)考核成績應(yīng)記錄在每個操作人員的個人培訓(xùn)記錄中。操作人員必須遵守化學(xué)去污試劑貯存及安全注意事項的規(guī)定，應(yīng)在隔離系統(tǒng)安裝地點的顯著位置張貼化學(xué)滅菌劑的材料安全數(shù)據(jù)表（MSDS）。在隔離系統(tǒng)使用前，需要對隔離器及相關(guān)設(shè)備安全性進(jìn)行檢查并作好使用記錄。